COVID-19 için Laboratuvar

Teşhisi ve Test Kılavuzu

Nis 02, 2021

James J Dunn, PhD, D (ABMM), MT (ASCP)

Antikor Saptanması

Kandaki ve tükürük örneklerindeki anti-SARS-CoV-2 antikorlarını saptamak için kullanılan testler, halihazırda veya daha önce SARS-CoV-2 ile enfekte olmuş hastaları belirlemek için kullanılır. 

Genel olarak, saptanabilir antikor düzeylerinin gelişmesi birkaç günden haftaya kadar sürebilir; bu nedenle, antikor saptama testleri, akut enfeksiyon tanısında sınırlı kullanıma sahiptir ve bunun için NAAT ile test etme tercih edilir. ^[ 7 ]  Bununla birlikte, akut SARS-CoV-2 enfeksiyonunun belirlenmesi için testlerin tek temeli temsil etmemesi gerekse bile, COVID-19 teşhisine yardımcı olarak antikor testlerinin kullanımı uygundur. ^{[ 58 , 59 ]} 

Bir antikor saptama testinin yorumlanmasında önemli olan, SARS-CoV2 enfeksiyonuna karşı antikor yanıtının doğası, dinamikleri ve zamanlaması hakkındaki bilgidir. 

Çeşitli çalışmalar, çoğu hastada serokonversiyonun semptomların başlangıcından 2 hafta sonra meydana geldiğini göstermiştir;

Hemen hemen tüm hastalarda semptom başlangıcından sonraki 28. günde tespit edilebilir seviyelerde anti-SARS-CoV2 antikorları vardır. ^{[ 60 , 61 ]}

 NAAT tarafından doğrulanan SARS-CoV-2 enfeksiyonu olan hastanede yatan hastaları içeren çalışmalar, immünoglobulin M (IgM), IgA ve IgG dahil anti-SARS-CoV-2'ye özgü antikorların tüm izotiplerinin varlığını gösterdi. ^[ 62 ]Algılanabilir IgM ve IgA titreleri, semptom başlangıcından 7-14 gün sonra ortaya çıktı (ve nadir durumlarda, semptom başlangıcından sonraki ilk gün kadar erken). Pik IgG seviyelerinin zamanlaması değişir. Bazı durumlarda IgG, IgM ile aynı anda tespit edilebilir, ancak hastaların çoğunda birkaç gün gecikir ve 15 ila 21 gün arasında platolar olur. ^[ 60 ] Çoğu kişide, antikor titresi hastalığın ciddiyeti ile ilişkilidir;

 Bununla birlikte, bazı hastaların saptanamayan antikor seviyelerine sahip olduğu görülmektedir. ^{[ 58 , 63 ]}

Antikor  testi çeşitleri

Antikor saptama deneylerinin geliştirilmesi için antijenik hedefler olarak iki SARS-CoV-2 antijeni kullanılmıştır: başak (S) ve nükleokapsid (N) proteinleri. S proteini, hücre yüzeyi anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) reseptörüne bağlanırken, N proteini viral replikasyon ve montajda önemli roller oynar, yüksek oranda korunur ve enfeksiyon sırasında antikorları S proteininden daha erken indükler. ^[ 64 

^] Ancak çalışmalar, bir konağın nötralize edici antikorlarının ağırlıklı olarak S proteinine yönelik olanlar olduğunu ileri sürmektedir. ^[ 65 ] .

Mevcut immünolojik testler, antikorların tüm izotiplerini saptayabilir: IgA, IgM ve IgG. Toplam antikor saptama deneyleri, birleştirilmiş tüm izotiplerin seviyelerini belirlemek için tasarlanmıştır. Şu anda izin verilen tüm testler, niteliksel veya yarı niceliksel sonuçlar sağlar.

Ticari SARS-CoV-2 serolojik testleri aşağıdakileri içerir:

·        Otomatik doğrudan kemilüminesans immunoassay (CIA)

·        Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA)

·        Hızlı yanal akış testi (LFA)

·        Plak azaltma ve mikro-nötralizasyon kullanan biyoanalizler

Otomatik doğrudan kemilüminesans immunoassay

CIA'da nicelik, manyetik boncuklar üzerine kaplanmış rekombinant antijenlerin bir kombinasyonu kullanılarak bu yöntemle lüminesans saptamasıyla sağlanır. Veriler, SARS-CoV-2 antikorlarının saptanması için CIA tekniğinin, toplam antikorların veya seçilen izotiplerin varlığının belirlenmesi için mükemmel duyarlılık ve özgüllük sunduğunu göstermektedir. 

Ayrıca, yüksek verimli numune testine olanak tanıyan bir otomasyon seçeneği sunar. ^[ 66 ]

Enzim bağlı immünosorbent deneyi

ELISA, toplam antikor içeriğini veya IgA, IgM veya IgG'yi seçici olarak tespit edebilir. ELISA'lar sıklıkla hastalarda antikor üretiminin zaman çizelgesi / serokonversiyonunu incelemek için kullanılır.

 ELISA formatının temeli, antikor-antijen reaktivitesidir; bir hasta numunesindeki analit, spesifik substratı bir okuma olarak kullanılan ölçülebilir bir sinyale dönüştüren bir enzim konjugatı kullanılarak tespit edilir. ELISA'nın avantajları, yüksek verimli hasta testini içerir. Dezavantajlar, standardizasyon eksikliği nedeniyle sınırlı tekrarlanabilirlik, değişken tespit limitleri ve değişken antijenlerin kullanımını içerir. Bu nedenle, duyarlılık ve özgüllük, testler arasında ve hatta farklı kullanıcılar tarafından doğrulanan testler içinde büyük ölçüde farklılık gösterir. ^[ 66 ]

Hızlı yanal akış testi,

ELISA'ya benzer LFA, bir yakalama ajanı olarak SARS-CoV-2 antijenini kullanır, ancak bir yanal akış şeridi formatında. ^[ 67 ] Yanal akış formatının en çekici avantajları, minimum örnek işleme ile birlikte klasik ELISA (birkaç saat) ile karşılaştırıldığında hızlı geri dönüş süresidir (10-30 dakika). Çoğu LFA, operatör tarafından sübjektif olarak yorumlanan niteliksel, görsel sonuçlar sağlar ve düşük kaynaklı ortamlarda hastaya yakın test yapılmasına olanak tanır. Bununla birlikte, LFA'nın mevcut maliyeti, yüksek verimli ELISA'nınkinden daha yüksektir. Dahası, LFA'nın COVID-19 tanı kapasitesini genişletme potansiyeli olmasına rağmen, bu testler hala değerlendirilmektedir ve büyük bir çalışma, ticari olarak mevcut 10 LFA arasında endişe verici tutarsızlıklar bulmuştur. ^[ 68 ]Bu nedenle, LFA sonuçları dikkatle yorumlanmalıdır ve takip testi önerilir.

Biyoassayler

Plak azaltma ve mikro-nötralizasyonun kullanıldığı biyoanalizler, aday teşhis testlerinin doğrulanması için gerekli verileri sağlar. Ancak, özel uzmanlık gerektirirler ve sınırlı sayıda oldukça uzmanlaşmış laboratuvarlar tarafından sunulurlar.

Antikor testinde diğer hususlar :

FDA, serum, plazma veya tam kan kullanan SARS-CoV-2 antikor testleri için EUA'lar yayınlamıştır; ^[ 9 ]  ayrıca, COVID-19 antikor testleri geliştiren ticari üreticilerin, testin doğrulama verileriyle birlikte EUA taleplerini sunmasını da zorunlu kıldı. 

Teşhis spesifikasyonları / test performansları (test özgüllüğü, duyarlılık, pozitif prediktif değer [PPV] ve NPV dahil) ile birlikte EUA alan güncellenmiş bir seroloji testleri listesi FDA web sitesinde mevcuttur. ^[ 9 ] FDA, seroloji testlerinin doğruluğunun değerlendirilmesinde aktif olarak yer almaktadır.

CDC, FDA tarafından EUA verilen antikor testlerinin tercihli kullanımını içeren önerilerle birlikte COVID-19 antikor testi için ara kılavuzlar yayınlamıştır. ^[ 59 ]

 Antikor saptama testlerinin PPV'sinin maksimize edilmesine ilişkin özel öneriler yapılmıştır; kılavuz ilkeler, önceden enfeksiyon olasılığı yüksek olan bireyler üzerinde seroloji testi yapmayı ve yüksek özgüllüğü olan antikor testlerini kullanmayı içerir. Ayrıca, CDC, iki bağımsız testi içeren iki aşamalı / ortogonal bir test algoritmasının uygulanmasını önerir ve ilk pozitif sonuç farklı bir antikor testi ile doğrulanır. ^[ 59 ]CDC, antikor test sonuçlarının hastanın klinik geçmişi ile korelasyon içinde yorumlanmasını ve sonuçların dikkatle yorumlanıp raporlanmasını şiddetle tavsiye eder.

CDC'ye benzer şekilde, Amerikan Klinik Kimya Derneği (AACC), FDA tarafından EUA almış testlerin veya yüksek karmaşıklığa sahip, CLIA sertifikalı laboratuvarlar tarafından geliştirilmiş ve doğrulanmış laboratuvar tarafından geliştirilen testlerin (LDT'ler) kullanılmasını önermektedir. Evde seroloji testi şu anda AACC tarafından desteklenmemektedir. ^[ 69 ]

Antikor testinin genel olarak faydaları :

·        NAAT ile bağlantılı olarak genel tanı duyarlılığını artırabilen semptomatik hastalarda mevcut enfeksiyonun teşhisi

·        Hastalık seyrinin izlenmesi, serokonversiyon süresinin tanımı ve antikor titrelerinin klinik tablo ve hastalık şiddeti ile korelasyonu

·        COVID-19'un popülasyon prevalansını belirlemeye yardımcı olmak için asemptomatik hastaların taranması veya gözetimi

·        İyileşen serum donörlerinin tanımlanması - Nekahet plazma tedavisi “pasif bağışıklık” sunabilir ve FDA tarafından acil bir araştırma ilacı olarak onaylanmış veya halk sağlığı acil durumlarında erken tedavi için EUA ile sağlanmıştır.

     Optimal donörlerin belirlenmesi, antikor titreleri ile klinik etkinlik arasında yerleşik bir korelasyon eksikliğinden dolayı zor olmuştur. Bununla birlikte FDA, toplama, antikor titresi testi ve iyileşen plazmanın kullanımı hakkında kılavuzlar yayınladı. ^[ 70 ]Ağustos 2020'deki rehberlik, bir Ortho-Clinical Diagnostics VITROS anti-SARS-CoV-2 IgG testi kullanılarak bir donör plazmasının anti-SARS-CoV-2 antikorları için test edilmesini önermektedir; -titer iyileşme plazma. Ek olarak, FDA, varsa nötralize edici antikor titrelerinin test edilmesini önerir. ^[ 70 ],

     Aşı immünojenitesinin değerlendirilmesi ve koruyucu immün durumu olan bireylerin belirlenmesi için :

SARS-CoV-2'ye karşı bağışıklık hakkında fikir veren araştırmaya acil ihtiyaç vardır. Uygun, doğrulanmış ve iyi performans gösteren seroloji testleri COVID-19 pandemisine halk sağlığı yanıtında önemli bir rol oynar.